1 1280 титр при артрите
Давно я хотела написать про антинуклеарный фактор, но меня все время что-то останавливало. Почему? Ну потому что писать об этом — это пытаться объять необъятное, а краткость — явно не сестра моего таланта)))
Определение антинуклеарного фактора (АНФ) -основной метод выявления антинуклеарных антител, который позволяет выявить большинство разновидностей антинуклеарных антител. Результатом определения АНФ является сам факт присутствия аутоантител, конечный титр разведения сыворотки и тип свечения ядра клетки.
АНФ-это не одно антитело!
Метод выявления АНФ был разработан Таном (1982), применившим в качестве субстрата человеческую перевиваемую эпителиоидную клеточную линию HEp-2 (вы могли видеть это название в бланке анализа). Это клеточная линия получена из опухоли гортани человека (аденокарциномы). Сравнительная неприхотливость этой линии, крупные ядра и присутствие всех человеческих антигенов сделало метод непрямой иммунофлюоресценции (нРИФ) с использованием перевиваемой клеточной линии НЕр-2 основным методом обнаружения АНФ.
В качестве субстратов могут применяться и другие клеточные линии (см карусель), однако благодаря хорошей морфологии и удобству культивирования именно линия Нер-2 стала общепризнанным субстратом непрямой иммунофлюоресценции. В англоязычной литературе иногда этот метод обозначают как FANA(Fluorescent AntiNuclear Antibody detection).
Иногда под термином «антинуклеарные антитела» иммунологические лаборатории называют тесты, как основанные на методах иммуноферментного и иммунохимическом анализе, так и метод иммунофлюоресценции.
Антинуклеарный фактор (АНФ) — это антитела, обнаруженные иммунофлюресцентным методом.
Необходимо выявлять АНФ класса IgG, так как выявление АНФ, представленных другими классами иммуноглобулинов не имеет самостоятельного значения.
Титр АНФ определяется как последнее разведение сыворотки больного, которое обладает четкой флюоресценцией (свечением) ядер клеток. При использовании клеточной линии НЕр-2 рекомендуется использовать исходный титр 1:80, в этом случае в норме титры АНФ менее 1:160. Для определения конечного титра обычно используется титрование шагом х2 (1:160-1:320 — 1:640 — 1:1280 – 1:2560 – 1:5120 и т.д.).
На фоне обострения заболевания обычно отмечаются титры АНФ более 1:640, а при ремиссии титры могут снижаться до 1:160-1:320.
Балльная оценка результатов выявления («в крестах» +++) позволяет лабораториям экономить реактивы и уменьшить трудозатраты на выполение исследований. В этом случае определение конечного титра не представляется возможным❌
Желательно определять конечный титр у всех положительных больных, что позволяет уточнять присутствие в сыворотке аутоантител, которые более тесно связаны с активностью процесса.
ТИПЫ СВЕЧЕНИЯ ЯДРА
Тип свечения ядра — одна из ключевых характеристик при выявлении АНФ. Каждая разновидность антинуклеарных антител (ANA) имеет конкретные мишени в клетке и отражает взаимодействие сыворотки больного с структурами внутри клетки. Тип свечения зависит от присутствия конкретных аутоантител в крови, на основе чего, можно сделать предварительное заключение относительно тех разновидностей антител, которые имеются в данной сыворотке. Тип свечения ядра клетки значительно увеличивает информативность выявления АНФ.
Использование клеток линии НЕр-2 позволяет охарактеризовать более 20 различных вариантов окрашивания ядра, однако для клинической практики достаточно выделить основные. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.
При гомогенном типе свечения аутоантитела реагируют с теми антигенами, которые распределены в ядре диффузно, т.е. входят в состав хроматина.
За счёт чего? Антитела против нуклеосом, ДНК, гистонов.
Когда? У больных с СКВ и лекарственной волчанкой, а также у больных со склеродермией.
Часто обнаружение высокого титра АНФ с гомогенным типом свечения указывает на диагноз СКВ.
Периферический тип свечения могут выделять отдельно, хотя он является разновидностью гомогенного. Периферический тип свечения обнаруживается у больных с антителами к двуспиральной ДНК и выявляется преимущественно при СКВ, заболеваниях печени.
Гранулярный тип (крапчатый, сетчатый) является наиболее частым встречающимся и, одновременно, наиболее неспецифическим.
За счёт чего? Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA.
Когда? СКВ, болезнь/синдром Шегрена, склеродермия, дерматомиозит/полимиозит, РА и ряда других болезней. Низкие титры (1:160-1:320) АНФ с гранулярным типом свечения могут быть в сыворотках крови у клинически здоровых лиц БЕЗ признаков системного заболевания.
Выявления очень высоких титров АНФ (1:2560-1:10000) с крупногранулярным типом свечения ядра обычно указывает на диагноз смешанного заболевания соединительной ткани и требует дообследования для выявления RNPантигена.
Антигены ядрышка могут выступать в качестве мишеней АНА, что приводит к обнаружению ядрышкового типа флюоресценции.
За счёт чего? PHК полимераза 1, NOR, U3RNP, PM/Scl.
Когда? Склеродермия и ее разновидности.
Центромерный тип отмечается при появлении антител к центромерам хромосом, и обнаруживается только в делящихся клетках. Его присутствие характерно при CREST-синдроме (вариант склеродермии).
Цитоплазматический тип свечения.
За счёт чего? Антитела к тРНК–синтетазам, в частности Jo-1, которые отмечаются при полимиозите. Кроме того, он выявляется у больных с АНА, направленными против других компонентов цитоплазмы клетки: при аутоиммунном гепатите, при первичном билиарном циррозе.
Можно охарактеризовать ряд других разновидностей свечения. Антитела к Scl-70 дают мелкогранулярное окрашивание ядра и ядрышек, анти-р80 — светящиеся точки в ядре, которые отсутствуют в митотических клетках.
Нередко может встречаться сочетание нескольких типов свечения, например мелкогранулярного и ядрышкового, что характерно для антител к Scl-70.
Иногда в низких разведениях преобладает один тип свечения, например гранулярный, а при дальнейших разведениях выявляется гомогенный или центромерный типы флюоресценции, что свидетельствует о наличии в сыворотке больного различных видов АНА.
Источник
[13-045]
Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG
1250 руб.
Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.
Синонимы русские
АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).
Синонимы английские
Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).
Метод исследования
Непрямая реакция иммунофлюоресценции.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Венозную кровь.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Не курить в течение 30 минут до исследования.
Общая информация об исследовании
Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.
Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90 % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.
При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.
При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.
Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.
Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.
Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).
Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.
Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.
Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.
Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.
Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.
У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.
В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
- Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
- Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
- Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.
Когда назначается исследование?
- При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
- При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).
Что означают результаты?
Референсные значения
Результат: отрицательный.
Титр:
Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:
- cистемная красная волчанка (в 95 % случаев),
- дерматомиозит/полимиозит,
- системная склеродермия (в 60-90 % случаев),
- синдром Шегрена (в 40-70 % случаев)
- смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
- синдром Рейно,
- дискоидная волчанка,
- лекарственная волчанка,
- ревматоидный артрит,
- некротизирующий васкулит,
- инфекционный мононуклеоз,
- лейкемия,
- злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
- тяжелая миастения,
- инфекционный эндокардит,
- хронический аутоиммунный гепатит,
- первичный билиарный цирроз печени,
- туберкулез,
- пневмокониоз,
- интерстициальный фиброз легких.
Типы свечения
Тип свечения | Для чего он характерен |
Гомогенный | Для СКВ, лекарственной волчанки, системной склеродермии, хронического активного гепатита |
Периферический | Для СКВ |
Гранулярный | Для СКВ, синдрома Шегрена, смешанной болезни соединительной ткани, ревматоидного артрита |
Ядрышковый | Для полимиозита/дерматомиозита, склеродермии, синдрома Шегрена, СКВ |
Центромерный | Для CREST-синдрома (кальциноза кожи, синдрома Рейно, эзофагеальной дисфункции, склеродактилии, телеангиоэктазии) |
Цитоплазматический | Для дерматомиозита/полимиозита, аутоиммунного заболевания печени, первичного билиарного цирроза |
Что может влиять на результат?
- Ложноположительному результату способствует:
- возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
- применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).
- Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.
Важные замечания
- В 5 % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
- Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13 % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
- Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
- При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.
Также рекомендуется
- Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
- Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
- Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
- Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
- Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
- Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
- Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
- Антистрептолизин О
- С-реактивный белок, количественно
- Ревматоидный фактор
- Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
- С3 компонент комплемента
- С4 компонент комплемента
Кто назначает исследование?
Ревматолог, иммунолог.
Литература
- Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed Normal, Illinois, 2007: 55-57 pp.
- Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011 Jan;63(1):191-200.
- Kumar Y, Bhatia A, Minz RW. Antinuclear antibodies and their detection methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited. Diagn Pathol. 2009 Jan 2;4:1. PMID: 19121207 [PubMed].
Источник
Лариса
, Москва
Добрый день! Хотела бы услышать Ваше мнение о моей проблеме. Мне 44 года, пол — женский. Рост 163 см, вес – 63 кг. Из заболеваний: узлы в щитовидной железе (эндокринные гормоны- в норме), эрозия (с подросткового возраста), небольшая миома, варикоз нижних конечностей, хронический тонзиллит. Кожа лица и тела – чистая.
По наследственности – у мамы диабет 2 типа, гипертония, варикозная болезнь, неделю назад поставили диагноз РА.
Предыстория — в 2012 (7 лет назад) году после летнего отпуска на море заболели колени. При обращении к врачу были сданы анализы и выявлен повышенный ревматоидный фактор (26 ме/мл при норме до 14 ме/мл). Anti-CCP и анти-MCV – отрицательно. Ревматолог сказал, что я не его клиент и отправил меня к травматологу. Был сделан рентген коленных суставов и поставлен диагноз — артроз 1 степени.
В дальнейшем колени продолжали побаливать и особенно после летнего отпуска. Тем не менее это не мешало мне заниматься спортом и даже бегать. Последний год бегать больше, чем на 2 км я уже не могла, начиналась сильная боль в коленях, которая проходила, если я переходила на быстрый шаг.
В январе 2019 наблюдалась в онкологическом центре по вопросу подозрения на РМЖ. Диагноз не подтвердился.
В марте 2019 года у меня произошла травма пальца на руке — при открывании холодильника он как-то неудачно подогнулся. 10 дней носила съемный гипс (ставили растяжение связок). В дальнейшем я стала замечать, что пальцы на руках иногда побаливают и даже чувствовала риск опять получить какое-то растяжение.
В июле 2019 при отдыхе на море в конце 2-й недели (когда у меня закончился солнцезащитный крем SPF50 и я намазала кожу кремом послабее) на одной руке, а также лице кожа сильно покраснела, было похоже на химический ожог. По возвращению домой, покраснение прошло примерно через неделю.
Еще спустя месяц (август 2019) я почувствовала, что ночью очень болят суставы и мышцы на руках и ногах. Днем суставы особенно не беспокоили, а ночью болели достаточно сильно. Начала с вечера мазать колени мазью долобене, боль немного утихала.
В сентябре стала чувствовать, что стали днем побаливать пальцы на руках. Есть небольшая скованность (они такие у меня уже много лет), скованность всегда одинаковая и не зависит от времени суток. И стали болеть мышцы от плеча до локтя, при том, что физические нагрузки были сведены к минимуму. Было пару дней, когда температура повышалась до 37,0-37,2 C без видимой причины.
Сдала анализы – КОК – норма, СОЭ-3 мм/ч, СРБ, криатинкеназа, мочевая кислота, ОСЛО, калий, натрий, хлориды, кальций ионизированный – все в норме, Atni-CCР отрицательно, антитела к виментину – отрицательно, антитела к вирусу гепатита С – отрицательно, РФ- 22 ме/мл (норма 0-14), АНФ — титр <1:1280 крупногранулярный тип свечения. Сдала иммуноблот антинуклеарных антител (15 основных антител) и иммуноблот антинуклеарных антител к склеродермии –отрицательные, АНФ – титр <1:1280 ядерный гранулярный тип свечения AC-2,4 (согласно номенклатуре ICAP 2019 указывает на присутствие антинуклеарных антител, направленных против антигенов SS-A/Ro, SS-B/La, Mi-2, TIF1γ, TIF1β, Ku, а также DFS70).
Что на текущий момент беспокоит – ночью болит правое бедро и иногда колени. Днем незначительная боль в пальцах рук (суставы не опухшие, подвижность в норме) и предплечьях. Обезболивающие не принимаю. Спортом занимаюсь осторожно, в основном ходьба и растяжки.
Диагноз мне не поставили, но назначили 3 месяца принимать плаквенил – 200 мг 1 раз/день.
Подскажите, пожалуйста, насколько в моем случае вероятно системное аутоиммунное заболевание? Может ли быть такой титр АНФ в отсутствие СКВ или РА? Что еще нужно сдать, чтобы убедиться или опровергнуть диагноз?
Спасибо большое заранее за помощь! С уважением, Евгения
Хронические болезни: хр.тонзиллит, варикоз, эрозия ШМ, миома
Что делать, если я не нашел ответ на свой вопрос?
Если у Вас похожий или аналогичный вопрос, но Вы не нашли на него ответ — получите свою онлайн консультацию врача.
Если Вы хотите получить более подробную консультацию врача и решить проблему быстро и индивидуально — задайте платный вопрос в приватном личном сообщении. Будьте здоровы!
Источник