Антинуклеарный фактор ревматоидный артрит

[13-045]
Антинуклеарный фактор на HEp-2 клетках, IgG

1250 руб.

Метод исследования с использованием человеческих эпителиальных клеток HEp-2, который позволяет обнаружить антинуклеарные антитела – один из маркеров системных заболеваний соединительной ткани.

Синонимы русские

АНФ, антиядерные антитела, антинуклеарные антитела (АНА).

Синонимы английские

Antinuclear Antibodies (ANA), Hep-2 Substrate, ANA-Hep2, Fluorescent AntiNuclear Antibody detection (FANA).

Метод исследования

Непрямая реакция иммунофлюоресценции.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Венозную кровь.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Не курить в течение 30 минут до исследования.

Общая информация об исследовании

Определение антинуклеарного фактора (АНФ) является «золотым стандартом» выявления антинуклеарных антител (АНА) и диагностики аутоиммунных заболеваний.

Патогенез системных заболеваний соединительной ткани (СЗСТ) тесно связан с нарушениями в иммунной системе и повышенной выработкой антител к структурам собственных клеток. Аутоантитела к компонентам ядра клеток – антинуклеарные антитела – взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и белками ядра, антигенами цитоплазмы, что проявляется воспалительными изменениями в тканях и органах, болями в суставах и мышцах, выраженным утомлением, потерей веса, кожными изменениями. АНА обнаруживаются при многих аутоиммунных заболеваниях, но наиболее характерны для системной красной волчанки (СКВ). АНА встречаются более чем у 90  % больных системными заболеваниями соединительной ткани, в настоящее время описано около 200 разновидностей, которые объединены единым названием – антинуклеарный фактор.

При определении АНФ методом непрямой флюоресценции чаще используется перевиваемая линия эпителиальных клеток аденокарциномы гортани человека НЕр-2. Клетки НЕр-2 являются очень удобным субстратом для лабораторного исследования, так как обладают крупными ядрами и на стеклах растут в один слой. АНА выявляются при связывании с внутриклеточными антигенами клеток НЕр-2.

При исследовании эпителиальные клетки НЕр-2 выращивают на стеклах, фиксируют и инкубируют с разведенной сывороткой крови пациента. После удаления избытка сыворотки клетки инкубируют с меченными флюоресцеином антителами, затем снова промывают и исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа. При этом определяется титр антител и тип свечения. Диагностически значимым считается титр более 1:160. При обострении ревматических заболеваний он превышает 1:640, а в период ремиссии снижается до 1:160-1:320. Чем больше антител, тем выше титр. По типу свечения можно установить мишени антинуклеарных антител, что имеет важное клиническое значение и определяет тактику дальнейшего обследования пациента. Основными являются периферический, гранулярный (мелко-/крупно-), ядрышковый, центромерный и цитоплазматический типы окрашивания ядра. Каждому типу свечения присущи очень характерные признаки, которые позволяют отличить один вариант от другого.

Гомогенное (диффузное) окрашивание связано с наличием антител к двуспиральной ДНК, гистонам и характерно для СКВ и лекарственной волчанки.

Периферическое свечение обусловлено периферическим распределением хроматина в ядре, связано с антителами к ДНК и специфично для СКВ. Данный тип свечения важно дифференцировать от окрашивания ядерной мембраны, которое происходит при аутоиммунных заболеваниях печени.

Гранулярное (крапчатое, сетчатое) окрашивание встречается наиболее часто и является наименее специфичным, выявляется при многих аутоиммунных заболеваниях. Аутоантигенами в данном случае выступают нуклеопротеиновые комплексы в ядре (Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B антигены и PCNA).

Очень высокие титры АНФ с крупногранулярным типом свечения часто указывают на смешанное заболевание соединительной ткани.

Нуклеарное (ядрышковое) окрашивание обусловлено антителообразованием к компонентам ядрышка (PHК-полимераза-1, NOR, U3RNP, PM/Scl), выявляется при склеродермии, болезни Шегрена. АНА иногда повышаются при эндокринных заболеваниях (сахарном диабете 1-го типа, тиреоидите, тиреотоксикозе, полиэндокринном синдроме), кожных заболеваниях (псориазе, пузырчатке), при беременности, после трансплантации органов и тканей, у больных на гемодиализе.

Центромерное свечение появляется при наличии антител к центромерам хромосом и характерно для формы склеродермии – CREST-синдрома.

Цитоплазматический тип свечения связан с антителами к тРНК-синтетазе, в частности к Jo-1, что характерно для дерматомиозита и полимиозита. Данный тип окрашивания также определяется при наличии антител к другим компонентам цитоплазмы при аутоиммунном гепатите, первичном билиарном циррозе.

Одновременное выявление различных типов свечения указывает на присутствие разных видов антител.

У здоровых людей может быть обнаружено мелкогранулярное свечение при низких, умеренных или высоких титрах АНА, но в норме крупнозернистые или гомогенные типы свечения не должны определяться.

В зависимости от результатов оценки типа свечения разрабатывается дальнейшая тактика лечения пациента и назначаются дополнительные исследования, уточняющие спектр АНА.

Для чего используется исследование?

• Для диагностики системных заболеваний соединительной ткани.
• Для дифференциальной диагностики ревматических болезней.
• Чтобы оценить эффективность терапии аутоиммунных заболеваний.
• Для наблюдения за течением системных заболеваний соединительной ткани.

Когда назначается исследование?

• При симптомах аутоиммунного заболевания (длительное повышение температуры, боли в суставах, усталость, потеря массы тела, изменение кожных покровов).
• При выявлении изменений, характерных для системных заболеваний соединительной ткани (повышение СОЭ, уровня С-реактивного белка, циркулирующих иммунных комплексов).

Что означают результаты?

Референсные значения

Результат: отрицательный.

Титр: 

Причины повышения титра АНФ на HEp-2 клетках:

• cистемная красная волчанка (в 95  % случаев),
• дерматомиозит/полимиозит,
• системная склеродермия (в 60-90  % случаев),
• синдром Шегрена (в 40-70  % случаев)
• смешанное заболевание соединительной ткани (синдром Шарпа),
• синдром Рейно,
• дискоидная волчанка,
• лекарственная волчанка,
• ревматоидный артрит,
• некротизирующий васкулит,
• инфекционный мононуклеоз,
• лейкемия,
• злокачественные новообразования (преимущественно лимфома),
• тяжелая миастения,
• инфекционный эндокардит,
• хронический аутоиммунный гепатит,
• первичный билиарный цирроз печени,
• туберкулез,
• пневмокониоз,
• интерстициальный фиброз легких.

Типы свечения

Что может влиять на результат?

• Ложноположительному результату способствует:

• • возраст старше 60-65 лет (в 10-37 % случаев);
  • применение лекарственных препаратов, которые могут привести к лекарственной волчанке (ацетазоламид, карбидопа, хлоротиазид, хлорпромазин, клофибрат, этосуксимид, соли золота, гризеофульвин, гидралазин, изониазид, соли лития, метилдопа, пероральные контрацептивы, пенициллин, фенилбутазон, фенитоин, примидон, прокаинамид, пропилурацил, хинидин, резерпин, стрептомицин, сульфаниламид, тетрациклин, тиазидные диуретики).

• Прием глюкокортикостероидов (преднизолон, дексаметазон, метипред) иногда приводит к ложноотрицательному результату.



Важные замечания

• В 5  % случаев СКВ возможен отрицательный результат данного анализа (АНФ-отрицательная СКВ). В таких ситуациях для уточнения диагноза необходимо определить антитела к SS-антигенам (Ro).
• Положительный результат теста не является абсолютным доказательством наличия аутоиммунного заболевания. У здоровых людей в 3-13  % случаев титр АНФ повышен и достигает 1:320.
• Результаты теста необходимо оценивать в комплексе с клиническими данными и другими лабораторными показателями.
• При положительном результате исследования рекомендовано определить специфичность АНА иммуноблотом.

Также рекомендуется

• Антитела к двухцепочечной ДНК (анти-dsDNA), скрининг
• Антитела к ядерным антигенам (ANA), скрининг
• Антитела к экстрагируемому ядерному антигену (ENA-скрин)
• Антитела к кардиолипину, IgG и IgM
• Антинуклеарные антитела, IgG (анти-Sm, RNP/Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, PM-Scl, PCNA, dsDNA, CENT-B, Jo-1, к гистонам, к нуклеосомам, Ribo P, AMA-M2), иммуноблот
• Общий анализ крови (без лейкоцитарной формулы и СОЭ)
• Скорость оседания эритроцитов (СОЭ)
• Антистрептолизин О
• С-реактивный белок, количественно
• Ревматоидный фактор
• Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК)
• С3 компонент комплемента
• С4 компонент комплемента

Кто назначает исследование?

Ревматолог, иммунолог.

Литература

• Wilson D. McGraw-Hill Manual of Laboratory and Diagnostic Tests 1st Ed Normal, Illinois, 2007: 55-57 pp.
• Mariz HA, Sato EI, Barbosa SH, Rodrigues SH, Dellavance A, Andrade LE. Pattern on the antinuclear antibody-HEp-2 test is a critical parameter for discriminating antinuclear antibody-positive healthy individuals and patients with autoimmune rheumatic diseases. Arthritis Rheum. 2011 Jan;63(1):191-200.
• Kumar Y, Bhatia A, Minz RW. Antinuclear antibodies and their detection methods in diagnosis of connective tissue diseases: a journey revisited. Diagn Pathol. 2009 Jan 2;4:1. PMID: 19121207 [PubMed].

Сдавать анализы на ревматоидный артрит показывает лечащий врач, который проанализировал жалобы пациента и провел осмотр. Заболевание носит аутоиммунный характер. Ученые до сих пор не могут прийти к единому мнению о причинах появления заболевания. Анализы при артрите на ранних стадиях не всегда показательны, поэтому использую рентген и другие методы исследования.

Реакция организма при возникновении заболеваний

Обращаясь за помощью к врачу, человек идет с определенным жалобами. Врач на приеме задает вопросы, уточняя болезненную симптоматику, локализацию и интенсивность боли. Проводит осмотр больного и назначает анализы для уточнения диагноза и установления степени заболевания.

Признаки и симптомы при артрите и артрозе:

• Болевые ощущения в суставах. При артрите боль постоянная, усиливается под утро и не проходит даже в состоянии покоя. В случае артроза ситуация иная – боль возникает только при физических нагрузках и активности, в состоянии покоя пациент не испытывает болевых ощущений в суставах.
• Деформация суставов. На поздних и даже на средней стадии течения заболеваний ярко выражена картина изменения форм суставов.
• Припухлость, отек, покраснение кожи в области поражения. Отечность вызвана воспалительным процессом.
• При артрозе в утренние часы больной испытывает скованность движений.
• Атрофия мышечной ткани вокруг суставов.

При наличии таких симптомов врач назначает обследования. Проводится осмотр больного. У женщин симптомы более ярко выражены. На локтях, на запястье, а также у основания среднего пальца на руке доктор наблюдает опухоль, отек, сухость кожи. Такие шишковидные образования свидетельствуют о ревматоидном артрите.

Анализы при ревматоидном артрите

Общий анализ крови сдается из безымянного пальца пациента. Чтобы исследования были показательными, необходимо подготовиться к сдаче анализа. Это важно для получения достоверных результатов. Подготовка к анализам на артрит и артроз:

• Минимум за сутки, а лучше за 3–5 дней исключить прием спиртного. Этанол влияет на значение показателей, повышая уровень глюкозы и эритроцитов.
• За 1–3 часа не курить. Табачный дым также сказывается на показателях. Повышается уровень лейкоцитов и эритроцитов, уровень сахара в крови.
• Исключить жирную и молочную пищу с вечера. Сдавать анализы лучше на голодный желудок, выпив утром стакан теплой воды.
• Снизить физическую активность за 1¬–2 суток до сдачи анализов. Лучше день провести в праздном отдыхе, давая отдых суставам.
• Исключить стрессы и постараться не нервничать. Стрессы изменяют общую картину состава крови. Вести привычный образ жизни, стараться больше отдыхать и желательно выспаться.

Общий анализ крови нужно сдать в обязательном порядке. Воспалительные процессы в суставах обязательно проявляются лейкоцитозом, а также наблюдается повышение СОЭ.

Бывают ситуации, когда АЦЦП находится в норме. Или же снижается при ремиссии, но это не говорит об отсутствии заболевания. Иногда встречается повышение данного показателя у здоровых людей вследствие особенностей функционирования иммунной системы конкретного человека. СОЭ при ревматоидном артрите повышается. Сам по себе этот фактор не является показателем. Врачи наблюдают общую картину, анализируя в том числе и скорость оседания эритроцитов.

Анализы сдают на голодный желудок

Антинуклеарные антитела не имеют эффективности, если этот показатель единственный. Исследование назначают только в комплексе с другими анализами. Так как ревматоидный артрит имеет аутоиммунную базу, то и анализы будут индивидуальными в каждом конкретном случае. Есть среднестатистические данные, которые проявляются в большинстве случаев, но не у всех пациентов. Так, для последней стадии заболевания антинуклеарный фактор положителен для 70–90% больных, а в начальной стадии не более, чем для 30%.

Показатели крови рассматриваются врачами совместно. Обращают внимание на циркулирующий иммунный комплекс. Этот показатель позволяет увидеть текущую острую фазу заболевания. Когда белки начинают выполнять функции антигенов, антитела перестают работать так, как нужно, поэтому в крови образуются иммунные комплексы. Они скапливаются на стенках сосудов, попадают в суставную жидкость и оседают на хрящевой ткани.

Ревматоидный фактор определяет в плазме крови белки, которые вырабатываются самим организмом. Белки выступают в роли антител. Иммуноглобулины, которые производит иммунная система человека, атакуют белки собственного организма. Содержание ревматоидного фактора у здорового человека не обнаруживается, у больного ревматоидным артритом значение увеличено в 2 или в 3 раза.

Анализ крови при артрите и его виды:

• Клинический или, другими словами, общий – этот тот, что сдают из пальца. Здесь можно увидеть количество лейкоцитов и эритроцитов, скорость их оседания. Посмотреть уровень глюкоза.
• Биохимический. Этот анализ крови при ревматоидном артрите позволяет увидеть детальную картину заболевания и состояния здоровья пациента. В данной расшифровке будет отображен уровень гемоглобина. Этот показатель важен, потому что у больных ревматоидным артритом обычно наблюдается легкая стадия анемии. Уровень гемоглобина в норме выше 120 г/л, у больных артритом показатель падает ниже 110 г/л.
• Иммунологический. Данный вид исследований позволит установить наличие и уровень антител, которые возникают при артрите. Так как болезнь является аутоиммунной, то и наличие антител обязательно. Костный мозг вырабатывает антитела к белкам, которые воспринимаются иммунной системой, как патологические.

Еще одно важное исследование – общий анализ мочи. Его используют для диагностики общего состояния пациента. Протеомный анализ мочи устанавливает синтез белков, которых в одном исследовании может участвовать более 10000. Исследование показательно и эффективно.

Какие конкретно анализы нужно сдавать подскажет лечащий врач, проводящий осмотр. На ранних стадиях заболевания общие анализы могут быть непоказательны. В таких случаях доктора рекомендуют провести иные исследования.

Дополнительные исследования

Помимо анализов крови и мочи, существует ряд других исследований, которые позволяют не только узнать состояние крови, но и увидеть сустав. Анализ синовиальной жидкости сустава позволит определить ревматоидный артрит и его степень. Жидкость вырабатывается суставной оболочкой. Она в первую очередь реагирует на любые изменения и возникновение заболевания.

Обычно жидкость вырабатывается в определенных объемах. При ревматоидном артрите возникает так называемый – выпот. То есть жидкость скапливается в больших количествах, от чего на поверхности сустава появляются ярко выраженные отеки. Врач стерильной иглой, специальной для подобных процессов, прокалывает кожу между сочленениями костей сустава, забирая порцию на образец.

Синовиальную жидкость забирают путем пункции

Для острой стадии ревматоидного артрита характерна картина, при которой цитология клеток находится в диапазоне 30000-50000 единиц, тогда как норма для здорового сустава составляет всего лишь 200 клеток на мкл. Также характерны лейкоцитоз, увеличение количества белков. Все это указывает на воспалительный процесс.

Расшифровка показателей синовиальной жидкости:

• Лейкоциты увеличиваются до 25000 единиц на мкл в основном за счет нейтрофилов в процентном соотношении до 90%.
• Содержание белка в синовиальной жидкости возрастает до 40–60 г/л.
• В цитоплазме лейкоцитов обнаруживаются сгустки белкового происхождения, что указывает на ревматоидный фактор.
• Также исследуют цвет, который должен быть прозрачным, но при артрите суставов становится мутным и желтоватым, иногда почти зеленым. Вязкость жидкости тоже повышается. Она уже не льется, а с трудом капает.

Рентгеновский снимок назначают практически в любом случае. Ревматизм ярко выражен белесыми областями и деформацией суставов. Заметны пустые области и области дробления хрящевой ткани. МРТ и КТ часто бывает только платным исследованием. А при предъявлении полиса ОМС и очередности, диагностика может быть проведена слишком поздно, так как очередь на подобное исследование велика.

Магнитно-резонансный томограф способен определить буквально все срезы костей, суставов, хрящевой ткани, отложения солей. Показатели МРТ:

• Разрушение хрящевой ткани. На снимке виден слишком сильный зазор между костями сустава. Образуется щель. Заметно скопление жидкости – выпот.
• Заметен эрозирующий фактор суставов. Заметно уже на средней стадии.
• Анкилоз развивается на последней стадии ревматоидного артрита.

Уникальная особенность диагностики при помощи МРТ заключается в том, что начало болезни хороший специалист может заметить еще до ее разрушительного воздействия на хрящевую ткань, кости, связки. В этом случае лечение назначается своевременно. Болезнь не может быть излечена до конца. Существуют возможности ее купировать. Ученые до конца не пришли к общему соглашению о причинах заболевания. Для одних начальным толчком может послужить недолеченная болезнь венерического спектра, бактериального вида, инфекционного. В каждом случае лечение различается.

Артрит и артроз

Артрит и артроз – разные заболевания. Артрит – аутоиммунная болезнь. По каким-то причинам иммунная система атакует собственные белки, от этого в суставе скапливается жидкость. Начинают разрушаться хрящи, потом кости сустава, даже связки. Артроз – это заболевание, вызванное усталостью суставов, когда хрящевая ткань истирается и уже не успевает восстанавливаться. Возникает только в пожилом возрасте.

Диагностика разрушения суставов производится при заборе синовиальной жидкости

Артроз коленного сустава в первую очередь диагностируется по болевым ощущениям при движении. Тогда как артрит взывает боль даже в состоянии покоя. Анализы при артрозе схожи, но показатели будут различаться, так как отсутствует иммунный фактор. Белок при артрозе не повышается.

Анализы на ревматоидный артрит в основном сводятся к установлению количества патологический аутоиммунных клеток. Чем их больше, тем глубже стадия болезни. Проводят общий анализ крови, биохимический, иммунологический, а также включают исследования МРТ, рентген, КТ. Пункция синовиальной жидкости укажет на содержание патологических клеток непосредственно в самом суставе. Анализы сдаются натощак. Исключают употребление спиртного.